T/NAASS 016-2022 宁夏高产奶牛胚胎移植技术规程

内容简介

本文件规定了宁夏高产奶牛胚胎移植供体牛的选择与饲养管理、冷冻精液选择、供体牛超数排卵、供体牛人工授精、胚胎采集与回收、胚胎移植技术操作要求
本文件适用于宁夏高产奶牛胚胎生产、移植技术推广应用的规范化操作
3　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1　胚胎移植EmbryoTransplantation选择与供体牛生理状况相近的受体牛，用非手术方法将胚胎移植到受体牛子宫角内，以便胚胎继续发育。4　供体牛的选择与饲养管理4.1　供体牛的选择4.1.1　供体牛应符合GB/T3157中荷斯坦母牛标准，系谱档案完整，体型线性评分在良好以上，体格健壮，无遗传缺陷。4.1.2　成年母牛做供体牛时，应选择参加奶牛生产性能测定（DHI)，生产性能优良的牛，或经遗传评估（EBV)有育种价值的牛。4.1.3　青年母牛做供体牛时，应选择全基因组检测（GEBV)有育种价值、或其父母生产性能优良的牛。4.2　供体牛的饲养管理4.2.1　供体牛饲养环境应保持舒适、稳定，避免出现各种环境、免疫接种等应激反应。4.2.2　保证科学、合理、平衡的日粮营养。饲养标准按照NY/T34执行，管理要求按照NY/T1445规定执行。4.2.3　超数排卵前1个月，根据供体牛体况，适量增加精料，适量补充复合维生素、微量元素，超数排卵期间体重应处于增重状态。5　冷冻精液选择5.1选择谱系清楚，遗传性状稳定，生产性能优良的验证种公牛冷冻精液与供体牛进行选配。选种选配的要求按照DB64/T1787规定执行。5.2常规冷冻精液质量符合GB4143的规定，性控冷冻精液质量符合GB/T31582的规定。6　供体牛超数排卵6.1　季节选择以春秋季节为宜，应尽量避开酷暑和严寒时节。6.2　激素选择超数排卵选用的生殖激素名称、类型、注射剂量及功能见附录A。6.3　超数排卵方案6.3.1　不考虑供体牛的发情时间，避开发情期。应用CIDR+FSH+PGF2α法，进行超数排卵处理。使用专用CIDR枪将CIDR送至供体牛子宫颈口处。6.3.2　放置CIDR之日计为0d，在7d～9d开始，采用连续递减注射法肌肉注射FSH，每天早、晚间隔12h各注射FSH1次，连续注射4d。6.3.3　在第5次和第6次注射FSH时，同时注射PGF2α。6.3.4　在第6次注射FSH后，取出CIDR，用生理盐水分别溶解320万IU青霉素和100万IU链霉素，并与50ml生理盐水混合后，冲洗供体牛阴道。具体操作方法见附录B.1。7　供体牛人工授精7.1　供体牛发情鉴定在第8次注射FSH后，每隔4h观察一次发情，每次0.5h以上。以供体牛站定接受其它牛爬跨做为发情的标准，并做好发情记录。7.2　供体牛常规冷冻精液人工授精7.2.1　供体牛站立发情后12h进行第1次人工授精，同时肌肉注射0.05mgLHRH-A3；间隔12h进行第2次人工授精。7.2.2　第2次人工授精后，通过直肠检查供体牛卵巢，如果还有大量卵泡没有排放，肌肉注射0.05mgLHRH-A3,间隔12h第3次人工授精。7.2.3　前两次人工授精时，每次使用2支冷冻精液，第3次人工授精使用1支冷冻精液。7.2.4　人工授精应输配至供体母牛子宫体。具体操作方法按照NY/T1335中的规定执行。7.3　供体牛性控冷冻精液人工授精7.3.1　配种间隔时间8h～10h，人工授精每次使用2支性控冷冻精液。其他操作程序与常规冷冻精液人工授精相同。7.3.2　人工授精应输配至左右两侧子宫角大弯处。具体操作方法按照NY/T3646中的规定执行。8　胚胎采集与回收8.1　准备工作8.1.1　在供体牛发情后的第6d，检胚实验室应提前做好清洁和消毒，室温宜在20℃～25℃，避免阳光直射。8.1.2　提前准备好胚胎采集回收所用的器械设备及试剂耗材，并做好清洗、消毒灭菌等。要求见附录C、附录D。具体操作方法按照NY/T1445中规定执行。8.2　胚胎采集在供体牛发情后的第6d～7d,用非手术方法进行回收。具体操作方法按照NY/T1445规定执行。8.3　检胚将回收的冲卵液迅速送到检胚室，通过体视显微镜进行检胚处理。具体操作方法按照NY/T1445规定执行。8.4　胚胎鉴定对检出的胚胎进行鉴定、分级和洗涤。具体操作方法按照NY/T1445规定执行。8.5　胚胎的保存经过鉴定后的可用胚胎，应尽快进行移植或冷冻保存。具体操作方法按照NY/T1445规定执行。8.6　记录做好每一批次每头供体牛的超数排卵、人工授精、胚胎回收及处理和胚胎生产统计记录，见附录E、附录F。9　胚胎移植9.1　受体牛的选择与饲养管理9.1.1　受体牛的选择受体牛应选择体格较大、健康、繁殖机能正常的荷斯坦青年牛或杂交改良肉用母牛做受体，人工授精两次不孕的不得作为受体。9.1.2　受体牛的饲养管理9.1.2.1　受体牛饲养环境按照4.2.1执行。9.1.2.2　应保证受体牛科学、平衡的日粮营养，饲养标准按照NY/T34和NY/T815执行。9.1.2.3　受体移植前1个月开始补饲，适量补充微量元素和复合维生素，移植期间体重应处于增重状态。饲养标准按照NY/T34和NY/T815执行。9.2　受体牛的发情处理9.2.1　自然发情黄体良好且与供体牛发情前后相差不超过±24h的自然发情受体牛，宜作为合格受体进行胚胎移植。9.2.2　同期发情9.2.2.1　处于发情周期7d～15d且直肠检查黄体良好的受体，采用1次注射PGF2α法进行同期发情处理。处理时间与供体牛相吻合。9.2.2.2　在不考虑发情周期的情况下，宜采用2次注射PGF2α或CIDR+PGF2α法对受体进行同期发情处理。处理时间与供体牛相吻合。9.2.3　发情观察同期发情处理的受体牛，在注射PGF2α24h后开始跟群观察发情，以稳定站立接受其它牛爬跨为准确发情标准，观察发情时间持续至撤栓后96h，做好发情观察记录。9.3　黄体检查9.3.1　受体牛发情第6d，通过直肠触摸子宫、卵巢，检查卵巢上黄体发育情况，确定排卵侧是否有功能性黄体。9.3.2　可移植的受体牛应具有以下特征：子宫发育良好，形态质地正常；黄体直径lcm以上且突起明显，质地稍硬弹性好。9.3.3　直肠触诊检查受体卵巢和黄体时，动作应轻柔，避免过分刺激黄体和卵巢。9.4　移植9.4.1　供体牛采集的新鲜胚胎，可以直接移植给与供体牛发情时间相差±24h，并经直肠触诊检查黄体合格的受体牛。9.4.2　冷冻保存的胚胎进行移植时，应进行解冻处理，并对胚胎质量进行鉴定，胚胎移植应在受体牛发情的第6d～7d进行。移植所用器械设备和试剂耗材，见附录G。具体操作按照NY/T1445规定执行。9.5　妊娠检查9.5.1　胚胎移植后应注意观察受体牛第一、第二情期返情情况。9.5.2　移植后28d～60d时，对未返情的牛只通过B超检查或直肠触诊等方法进行妊娠检查并做好记录。9.5.3　移植后90d～120d时进行直肠触诊复检。妊娠检查时动作应轻柔，避免引起流产。9.5.4　受体牛妊娠后，应加强饲养管理，营养全面，与其它牛分群饲养，避免打斗、追赶、抽打等引起流产。9.6　记录做好受体牛的发情观察、黄体检查、胚胎移植和妊娠检查记录，记录要求和方法见附录H。