T/AHFIA 043-2019 白酒中α-亚麻酸和 L-苯基乳酸的测定 高 效液相色谱法

内容简介

主要条款：本标准的章节由范围、试剂与材料、主要仪器、测定步骤、结果计算、精密度以及检出限、方法不确定度组成。本标准中主要技术参数、试验验证参数如下：1、主要技术参数的确认1.1色谱柱的选择实验选取了两根不同型号的色谱柱，两种型号的色谱柱分别为HSST3和BEHC18色谱柱，通过使用单因子变量法，最终确定BEHC18色谱柱分离较好，能够将α-亚麻酸和L-苯基乳酸完全分离。色谱图如图1所示图1所示为：标准样品的色谱图1.2流动相的选择实验对流动相的选择首先选定水-甲醇、乙酸-甲醇，水-乙腈，甲醇-磷酸等进行实验，通过实验后，均发现效果较差，不能够很好的实现分离。发现使用低浓度的磷酸对两种物质的分离会起到很大的作用，配制1%、0.5%以及0.1%的磷酸溶液作为流动相分别进行实验，实验结果表明，使用0.1%的磷酸分离较好，而且峰形较好，满足使用要求，故实验选择0.1%的磷酸作为流动相进行α-亚麻酸和L-苯基乳酸的分离。1.3波长的选择通过查找文献并进行试验，实验阶段对本次实验进行了系统归纳与总结，通过使用210-500nm的波长段扫描，得到相应的3D扫描图，经过后期的提取色谱图和文献报道，确定最佳检测波长205nm。标样验证进行相应的波长验证。2、试验验证各项技术参数确定后，标准制定小组通过精密度、重现性、稳定性和回收率试验验证效果，获得的平行测定结果的相对标准偏差RSD%均小于5，其精密度符合方法学的要求；并进行了异地验证试验及方法不确定度的计算，提高了本方法规范性、统一性和科学性。2.1标准曲线的建立准确吸取α-亚麻酸和L-苯基乳酸混合标准溶液，分别配制5个浓度的溶液（α-亚麻酸标准曲线浓度：20mg/L、40mg/L、80mg/L、160mg/L、400mg/L；L-苯基乳酸标准曲线浓度：25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、500mg/L）。测定5个浓度的标准混合工作液，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；R2=0.998，线性良好。2.2精密度对同一白酒样品，按照样品制备方法平行制备6份样品，并用本方法进行α-亚麻酸和L-苯基乳酸检测（其中一个样品重复进样6次），所得重复性和重现性检测结果如表1和表2所示表1α-亚麻酸和L-苯基乳酸重复性检测结果项目　　次数　1　2　3　4　5　6　RSDL-苯基乳酸　44.1　44.57　44.73　44.96　44.84　45.08　2.20%α-亚麻酸　50.53　49.74　50.47　50.96　50.52　51.39　1.10%由表1知，六次重复测定结果的RSD为2.20%和1.08%，方法重复性良好。表2α-亚麻酸和L-苯基乳酸重现性检测结果项目　　次数　1　2　3　4　5　6　RSDL-苯基乳酸　415.32　398.10　401.26　450.22　438.30　387.62　4.92%α-亚麻酸　399.62　396.24　402.64　401.28　404.64　403.16　7.46%由上表2知，重现性测定结果的RSD=4.92%和7.46%，重现性良好。2.3加标回收率实验取3个已知α-亚麻酸和L-苯基乳酸含量分别为：48.62mg/L和15.45mg/L的样品，使用已知浓度的α-亚麻酸和L-苯基乳酸标准品配制三个浓度水平的样品，按照标准所述方法处理检测，计算回收率均在80%-120%之内，具体如下表3所示。表3酒样中α-亚麻酸和L-苯基乳酸的加标回收率实验结果加标物　底物浓度（mg/L)　加标水平（mg/L）　　40　100　400　　实测值　回收率　实测值　回收率　实测值　回收率L-苯基乳酸　15.45　47.95　81.25%　112.85　97.40%　346.07　82.66%α-亚麻酸　48.62　85.12　91.25%　145.92　97.30%　415.14　91.63%2.4方法的检出限与定量限对本方法作如下灵敏度测试：灵敏度测试包括仪器的灵敏度与方法的灵敏度，仪器的灵敏度用仪器的检出限表示，取信噪比≥3的L-苯基乳酸和α-亚麻酸的混合标准溶液的最小浓度为仪器检出限；方法的灵敏度用方法的定量限表示，取信噪比≥9的L-苯基乳酸和为α-亚麻酸混合标准溶液的最小浓度为方法定量限。所得的相关数据见表4。表4酒样中α-亚麻酸和L-苯基乳酸的定量限和检出限的数据名称　检出限mg/L　定量限mg/LL-苯基乳酸　1.00　5.00α-亚麻酸　1.00　5.002.5异地验证实验本方法已与安徽国科检测科技有限公司液相液质室进行了异地实验室验证，结果如下表5。表5酒样中α-亚麻酸和L-苯基乳酸异地实验室比对结果